达·芬奇《美丽公主》（约1496年，三色蜡笔牛皮纸画，33 × 23.9 cm，彼得·西尔弗曼私人收藏）

其实，《蒙娜丽莎》的微笑并非达·芬奇的第一次尝试，早在数年前，在另一幅更早的作品《美丽公主》（ La Bella Principessa）中，达·芬奇便开始有意识地去探索这种“神秘的微笑”。这幅画是米兰公爵卢多维科·斯福尔扎的13岁私生女比安卡·乔瓦娜·斯福尔扎的侧身像，绘制在一张牛皮纸上，是公爵赠送给比安卡小姐的《斯福尔扎家族史》中的一页。谢菲尔德哈勒姆大学心理学系的亚历桑德罗·索兰佐在2015年的《视觉研究》上发表了一项实验结果：他安排志愿者们从不同的角度和距离观察这幅油画，发现《美丽公主》与《蒙娜丽莎》有着相似的效果：当从远距离观看或视觉焦点放在人物的眼睛上时，便能看到微笑的表情。当从近处观看或将视觉焦点集中于嘴唇的时候，微笑就消失了。